Axon Instruments Patch-Clamp Amplifiers

アクソンインストメント　パッチクランプ増幅器アプリケーション

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  シングルチャネル記録

  Tパッチクランプ法はガラスマイクロピペットが細胞膜にギガオームシール(GΩ)形成することが必要となります。そのマイクロピペットはイオンを通す為、電解質の溶液に浸かったワイヤーも必要になります。ギガオームシールを作成後、膜の「パッチ」が細胞から引っ張られます。もし、そのパッチの中にシングルイオンチャネルがあれば、電流を測定することができます。超低ノイズでとても小さなコンダクタンスを持つイオンチャネルにAxopatch200Bは理想的です。

• イオンチャネル

  イオンチャネルは脂質二重層に気孔を形成している蛋白質の集まりです。それぞれのチャネルは特定のイオンだけを通します（例：カリウム, ナトリウム、カルシウム、塩化物）。パッチクランプはとても感度の良い増幅器、質の高いデータ取得装置、結果を評価する便利なソフトウェアを使い、イオンチャネルの活動と関連する膜の中の電流や電圧をリルタイムで直接測定するのに使われています。
  
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  パッチクランプ

  パッチクランプ法はガラスマイクロピペットが細胞膜にギガオームシール(GΩ)形成することが必要となります。そのマイクロピペットはイオンを通す為、電解質の溶液に浸かったワイヤーも必要になります。ホールセル記録法は低アクセス抵抗を提供する為、膜電圧をコントロールし、膜のパッチを弱めの吸引で破ります。その他に、インサイドーアウトまたはアウトサイド-アウト法を使い、膜のパッチを細胞から引っ張りシングルチャネルを通る電流を測定することもできます。

• ホールセル記録

  ホールセルパッチクランプ法はガラスマイクロピペットが細胞膜にギガオームシール(GΩ)形成することが必要となります。そのマイクロピペットはイオンを通す為、電解質の溶液に浸かったワイヤーも必要になります。弱めの吸引によって膜のパッチは破られ細胞全体へ低抵抗でアクセスできます。それにより、膜を通る電圧をコントロールし、膜を通ってイオンチャネルを通る電流を測ることができます。
  
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  シリーズレジスタンス補正

  シリーズレジスタンスは増幅器とホールセル記録法を使用する細胞内との間のすべての抵抗の合計です。オームの法則により、この抵抗が大きければ大きいほど、コマンドレベルと計測された値の差が大きくなります。これにより実際に電圧、または電流測定にエラーが生じる可能性があります。この問題を克服する為、モレキュラーデバイスの増幅器はシリーズレジスタンスへの電圧、電流降下で起こるエラーを補正する回路を組み込んであります。

• ボルテージクランプ増幅器

  ボルテージクランプ法を実験で使用する時、細胞内の膜電位をコントロールし、その電圧を維持するのに必要な電流を測定します。この電圧コントロールをコマンドボルテージと呼びます。このコマンドボルテージを維持するには増幅器は電流を流す必要があります。流された電流は開いているイオンチャネル電流と同じ、また逆になります。それにより増幅器は開いているイオンチャネルの膜を流れる電流の量を測ることを可能にしています。
  
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  カレントクランプ増幅器

  カレントクランプは電流注入して膜電位を測定する方法です。膜電位を測るには、MultiClamp700BとAxoclamp900Aは、電流注入による電圧降下をモニターします。カレントクランプ法は一般に模擬刺激ですが、本物のような波形を細胞に加え、細胞膜への影響を観察します。この方法は活動電位などの重要な細胞的活動の評価に適しています。