Frequently Asked Questions

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よくある質問


BLIとは何ですか?

Bio-Layer Interferometry (BLI)は,分子間相互作用のリアルタイム測定を可能にするラベルフリーバイオセンサ技術です。
BLIは、使い捨て光ファイバーで、バイオセンサーの表面から反射される白色光の干渉パターンの変化を検出します。

BLIについて詳細はこちら


どの様な種類のセンサーがあるのですか?

ForteBioは、様々な生物学的用途のバイオセンサーを準備しています。
現在提供されているバイオセンサーはこちらから確認できます。


Octetは未精製のサンプルでも測定できますか?

Octetシステムを使用したBLI測定は、バイオセンサーの先端に結合したタンパク質の量変化を分析しており、ほとんどの生物学的用途でサンプルがどのような媒体であるかは無関係です。定量および速度論的測定は、血清含有培地、DMSO含有緩衝液、ペリプラズム画分、未確認の細胞培養上清、および未確認の細菌溶解物中で行うことができます。


どれくらいのサンプル濃度が必要ですか?

正確な測定を行うために必要とされるサンプル濃度範囲は、使用される機器の種類(OctetまたはBLItzシステム)と、サンプルの種類、特定の相互作用に依存します。

例:標準のヒトIgG定量測定は、Octet RED96およびOctet RED384システムで50 ng / mL〜2000 µg / mLのサンプルを2分間インキュベートすることで、プロテインAバイオセンサーを使用して行うことができます。最良の結果を得るためには、分子特異的かつ各アッセイに合わせて定義した線形ダイナミックレンジ内で分析することをお勧めします。


Octetのアッセイではどれくらいの量のサンプルが必要ですか?

正確な測定を行うには、標準の96ウェルマイクロプレートに最低180 µLのサンプル容量が必要です。標準の384ウェルマイクロプレートでは、必要なサンプル量は120 µLです。傾けた384TWマイクロプレートでは、必要な最小量は40 µLです。サンプルは非破壊的に分析されるので、マイクロプレートウェルから完全に回収することができます。
Octet機器用の推奨マイクロプレートの詳細については、Octet機器用の推奨マイクロプレートとは何ですか?を参照してください。


Octetシステムの96ウェルマイクロプレートでサンプル量が180 µl未満の場合はどうなりますか?

サンプル量が180 µL未満の場合、マイクロプレートウェルのオービタル攪拌中に内部反射が原因で測定アーティファクトが生じる可能性があるため推奨されません。


オクテットシステムを使用してどのようなスループットを達成できますか?

ForteBio Octetシステムは柔軟性があるため、実行される特定の分析の性質と使用されるOctet機器モデルによってスループットが異なります。


Octet HTXシステムでのハイスループットの自動ヒトIgG定量アッセイでは、96サンプルの全てをアッセイし、データを2分で完全に分析できます。自動off-rateスクリーニングでは、96ウェルマイクロプレートを数時間ではなく数分で分析できます。スループットの仕様については、他のOctetシステムのデータシートをご覧ください。

Octet HTX System Datasheet

Octet K2 System Datasheet

Octet RED96 System Datasheet

Octet QKe System Datasheet

Octet RED384 System Datasheet


定量


非特異的結合をどのように防ぐことができますか?

ARとAR2Gを除くすべてのForteBioバイオセンサーは、ForteBioバイオセンサーの表面にタンパク質層を含み、ほとんどの非特異的結合現象を最小限に抑えます。このタンパク質層は、捕捉分子の再現可能な付着を可能にし、そしてセンサー表面との直接的相互作用を妨げることによって結合タンパク質がそれらの本来の結合特性を維持することを可能にしています。非特異的または望ましくない結合事象のさらなる減少は、BSAのような物質を用いてブロッキング工程を行うことによって潜在的に達成することができます。


カイネティクス


バイオセンサーにはいくつの結合部位がありますか?

ForteBioバイオセンサーは、再現性のある捕捉分子の付着を可能にし、非特異的結合を最小限に抑えるためにタンパク質層でコーティングされています。
タンパク質立体配座は、バイオセンサーあたり約109の捕捉部位が存在します。


Octetシステムでは、拡散効果をどのように回避できますか?

カイネティク測定における拡散の影響を克服するために、サンプルプレートはバイオセンサーに対して軌道運動をします。
測定は静的サンプル(ローディングステップ用)、または100〜1,500 rpmの範囲の動作下で実行します。


y軸の厚さはなぜあるのですか?

生データのOctetまたはBLItzのリアルタイムのカイネティクス表示は、バイオセンサーの表面への結合の変化量を表します。
Y軸は、平均光学厚さに対する変化の関数である BLI干渉ピークにおける波長変化(nm)を測定します。


オフレートとオンレートはどのくらいの速さで測定できますか?

Octetシステムでの迅速なカイネティクス測定は、データサンプリング速度によって制限されています。
実際には、タンパク質動態の正確な測定は、わずか20秒で完了するものまでの速度に対して行うことができます。


最も遅い測定可能なオフレートは何ですか?

オクテットでのオフレート測定は、長期間にわたって行うことができます。主な制限はマイクロプレートウェルからのサンプルの蒸発です。